Kit de purificación de ARN viral “Viral RNA Extraction from Respiratory Specimens”

Mini Kit EzGene DNA/RNA Extraction Kit para 250 muestras, proporciona un método fácil y confiable para aislar RNA viral total de plasma, suero, aspirados o lavados nasofaríngeos u orofaríngeos, hisopos nasofaríngeos u orofaríngeos, lavado bronquioalveolar, aspirados traqueales y esputo.

Este procedimiento ha sido probado para aislar ácidos nucleicos de COVID-19, Hepatitis A, Hepatitis C y VIH. El ARN aislado se puede usar para PCR, qRT-PCR y otras aplicaciones posteriores.

La extracción puede realizarse de manera manual o automatizada

Para muestras respiratorias que incluyen: aspirados o lavados nasofaríngeos u orofaríngeos, hisopos nasofaríngeos u orofaríngeos, lavado broncoalveolar, aspirados traqueales y esputo. Las muestras de hisopos deben recogerse solo en hisopos con punta sintética con ejes de aluminio o plástico. Los hisopos con alginato de calcio o puntas de algodón con ejes de madera no son aceptables

También para muestras de suero, plasma u otros fluidos corporales.

Contenido del Kit VR6568-02

• Catalog VR6568-02
• Preps 250
• Buffer LYE  90 mL
• Proteinase K (25 mg/mL) 4 mL  
• RNA Wash Buffer * 50 mL
• Buffer RB* 90 mL
• Solution 550 µL
• DEPC-Treated ddH2O  15 mL
• Mini Column with collection tubes 250

Protocolo (Manual)

Protocolo de aislamiento de ARN viral

El protocolo está desarrollado para procesar muestras de 50-300 μL.

Pipetee 20 µL de Proteinasa K, 2 µL de Solución L y 300 µL de Tampón LYE en un tubo de 1.5 ml. Calcule el número de muestras a procesar y haga una mezcla maestra de proteinasa K, solución L y tampón LYE.

Pipetee 300 µL de aspirados o lavados nasofaríngeos u orofaríngeos, hisopos nasofaríngeos u orofaríngeos, lavado broncoalveolar, aspirados traqueales, o plasma, suero, en el tubo de 1.5 mL del Paso 1. Mezcle bien con un vórtex de pulso durante 10 segundos. Incubar a temperatura ambiente durante 10 minutos para lisar las células y el virus.

Agregue 600 µL de isopropanol y mezcle bien mediante un vórtice de pulso durante 5 segundos. Gire brevemente para recoger la gota de la tapa.

Nota: Mantenga la proporción de (Muestra + Tampón LYE): Isopropanol = 1: 1

Transfiera 600 µL de la muestra del paso 3 a una columna de ARN y centrifugue a 10,000 rpm durante 30 segundos. Deseche el flujo con cuidado a un contenedor de residuos pipeteando y vuelva a colocar la columna en la colección. Transfiera la muestra restante a la columna y centrifugue a 10,000 rpm durante 30 segundos. Deseche el flujo y vuelva a colocar la columna en el tubo de recolección. Nota: Al transferir la columna / tubos de recolección, sostenga siempre el borde superior del tubo de recolección, no la columna, para evitar una posible caída del tubo de recolección.

Agregue 500 µL de Tampón RB a la columna y centrifugue a 10,000 rm durante 30 segundos. Deseche el flujo continuo. Vuelva a colocar la columna en el tubo de recolección.

Agregue 500 µL de tampón de lavado de ARN a la columna y centrifugue a 10,000 rpm durante 30 segundos. Deseche el flujo continuo. Vuelva a colocar la columna en el tubo de recolección.

Centrifugar la columna vacía a 12,000 rpm durante 2 min. Es crítico eliminar el etanol residual para una elución óptima.

Transfiera la columna de ARN a un tubo de 5 ml sin RNasa, agregue 35-50 µL de agua tratada con DEPC a la columna y centrifugue a 10,000 rpm durante 30 segundos. El ARN viral está en el líquido de flujo continuo.

Opcional: Agregue el eluyente nuevamente a la columna para una segunda elución.

Nota: La primera elución normalmente produce el 70% del ARN, mientras que la segunda elución produce otro 20-30% del ARN unido a la columna.

Nota: El ARN purificado se debe poner en hielo para la aplicación aguas abajo o almacenar a -20 ° C.